Каталог товаров
Заказать звонок
l4

Выбор объективов для микроскопа – Часть 4

8. Какой метод наблюдения будет использоваться? Нужна ли методика повышения контраста?

Эта статья — четвертая из цикла «Выбор объективов для микроскопа». Ссылки на первую, вторую и третью части.

Не все объекты можно с одинаковых успехом рассмотреть в светлом поле. Если Вы имеете дело с толстыми образцами, слишком тонкими, прозрачными, двулучепреломляющими и т.п., то необходимо применение определённой методики контрастирования. Это тёмное поле, флуоресценция, дифференциальный интерференционный контраст (ДИК), фазовый контраст, поляризация, а также вариации этих методик (см. рис. 8). Эти методы используются повсеместно как в проходящем (кроме флуоресценции), так и в отражённом свете (кроме фазового контраста). Объективы для осуществления каждой из методик проектируются специальным образом, а информацию о методе контрастирования можно найти на самом объективе. В тёмном поле будут видны тонкие прозрачные структуры (в проходящем свете), фазовый контраст используется для выделения тонких неокрашенных предметов с различными показателями преломления. Соответствующий объектив для ФК можно распознать по наличию надписи «Ph» зелёного цвета с числом (1, 2 или 3, в зависимости от размера фазового кольца внутри). ДИК обозначается как DIC, а поляризационные объективы имеют всю маркировку красного цвета и надпись «Pol». Подробнее о методах контрастирования читайте в нашей статье.

contrast 1
Рисунок 8 – Представление различных образцов в основных методиках контрастирования

9. В какой среде находится образец?

Большинство объективов проектируется для работы в воздушной среде, что подразумевает наличие воздушной прослойки между образцом и фронтальной линзой объектива. Но многие создаются также и для работы в иммерсионной среде, так что имеют повышенный показатель преломления, позволяющий преодолеть предел числовой апертуры 0.95 для воздуха (посредством более полного сбора света) и тем самым повысить разрешающую способность объектива (см. рис. 9).

К примеру, в качестве иммерсионной среды может выступать вода, масло, силиконовое масло. Для каждого конкретного образца подбирается своя иммерсия, а выбор наиболее подходящего иммерсионного объектива критичен, поскольку это в значительной степени влияет на качество изображения, особенно при больших увеличениях.

immersion
Рисунок 9 – Сравнение иммерсионных сред (воздух с показателем преломления n = 1 и масло с n = 1.51). Свет, проходящий через масло, теряет полезную информацию в меньшей степени

10. В какой среде находится образец

На качество изображения объективов с большой ЧА в значительной степени влияют оптические свойства и толщина среды между образцом и фронтальной линзой.

Иммерсионные объективы спроектированы специально для работы с иммерсией, покровным стеклом и средой, в которой находится образец. То есть формально все эти слои можно считать продолжением фронтальной линзы и поэтому расчёт оптической системы и коррекции прост. Однако в случае с «сухими» объективами отклонение значения толщины покровного стекла (от стандартного значения 0.17 мм) приводит к пропорциональной сферической и хроматической аберрации. И чем больше ЧА, тем сильнее ухудшается изображение.

Но и в случае иммерсионных объективов есть свои нюансы — если образец находится в водном растворе на большом удалении от покровного стекла при использовании масляного объектива, возникают сильные аберрации, и объект «размазывается» вдоль оптического пути.  По этой же причине в каких-то случаях предпочтительнее использовать масляный объектив, а в каких-то — водный.

Зачастую в процессе производства покровных стёкол они получаются нестандартной толщины. Для её компенсации проектируются объективы с корректировочным кольцом, поворот которого изменяет расстояние между основными линзами внутри объектива, что позволяет подстраивать объектив под толщину покровного стекла. Кроме того, существуют объективы, которые можно поворотом кольца подстроить под разные иммерсии.

11. Используете ли Вы продвинутую систему микроскопа?

Помимо широкопольной микроскопии, существуют различные методы исследования посредством микроскопа, такие как конфокальная микроскопия, конфокальная микроскопия с вращающимся диском, мультифотонная лазерная микроскопия, флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения, флуоресцентная корреляционная спектроскопия, флуоресцентная микроскопия плоскостного освещения, лазерная абляция и др. Если Вы применяете одну из таких методик, то выбор подходящего объектива становится критичным. По этой причине необходимо подбирать специальные объективы. Выбор правильного объектива с наибольшей вероятностью улучшит изображение и предоставит лучшую надёжность при выполнении анализа и количественной оценки.

daniil

Даниил Гожальский, технический специалист,MSc in Nanotechnology

Последние публикации

Показать все
Как проводить измерения на микроскопе? Часть 2
Как проводить измерения на микроскопе? Часть 2
2. Измерение линейных размеров с помощью окулярного винтового микрометра. Эта статья - вторая часть статьи…
Как проводить измерения на микроскопе? Часть 1
Как проводить измерения на микроскопе? Часть 1
Содержание 1. Измерения на микроскопе линейных размеров с помощью штриховой пластины в окуляре (окулярного микрометра).…
Поляризация света. Поляризационная микроскопия
Поляризация света. Поляризационная микроскопия
Поляризационная микроскопия, описание методики. Солнце и практически все искусственные источники света излучают световые волны, векторы…
Показать все
Подберем лабораторное оборудование для работы
Подберем лабораторное оборудование для работы
Закажите лабораторное оборудование указав контактные данные и мы с вами свяжемся в ближайшее время.

Этот сайт использует cookies.